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    研域課堂:培育基怎么消除組織培育的污染?

    發(fā)布時間: 2020-03-04  點擊次數(shù): 1558次

    當(dāng)重要的培育污染時,研究者或許企圖消除或控制污染。首要,確認(rèn)污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用試驗室消du劑消du培育器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素或許對一些細(xì)胞系有du性,因而,做劑量反響試驗確認(rèn)抗生素和抗霉菌素發(fā)生du性的劑量水平。下面是推薦的確認(rèn)du性水平緩消除培育污染的試驗過程。

    ① 在無抗生素的培育基中消化、計數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

    ② 分散細(xì)胞懸液到多孔培育板中,或幾個小培育瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。
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    ③ 每天觀測細(xì)胞du性目標(biāo),如脫落,呈現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。

    ④ 確認(rèn)抗生素du性水平后,運用低于du性濃度2-3倍濃度的抗生素的培育液培育細(xì)胞2-3代。

    ⑤ 在無抗生素的培育基中培育細(xì)胞一代。

    ⑥ 重復(fù)過程4。

    ⑦ 在無抗生素的培育基中培育4-6代,確認(rèn)污染是否以已被消除。
     
    培育基操作建議:

    1、商品化的應(yīng)根據(jù)運用說明書上的要求進行貯存。標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有批號,生產(chǎn)日期、有效期及有關(guān)特性。所選用的保藏和運送條件應(yīng)使限度失掉水分并提供機械維護。

    2、配制好之后應(yīng)保存在2~25℃避光的環(huán)境。若保存于非密閉容器中,一般在三周內(nèi)運用;若保存于密閉容器中,一般在一年內(nèi)運用,瓊脂培育基不得在0℃或0℃以下存放,防止冷凍破壞凝膠特性。若要長期保存,瓊脂平板應(yīng)密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分丟失。

    3、保存于密閉容器中,可防止水分丟失以延長保存時刻。

    4、滅菌后應(yīng)立即取出,不得儲藏在高壓菌器中,避免影響質(zhì)量。制備好之后應(yīng)保存在2~25℃、避光的環(huán)境。

    5、固體培育基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或選用流通蒸汽進行,只允許一次,融化后應(yīng)放在45~50℃的水浴中,不得超越8小時。

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