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    上海研域帶您了解ELISA試劑盒實驗詳細(xì)步驟

    發(fā)布時間: 2023-07-18  點(diǎn)擊次數(shù): 1212次

    ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。

    ELISA試劑盒包含預(yù)包被酶標(biāo)板、檢測抗體、鏈酶親和素標(biāo)記的HRP、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測緩沖液等10個成分。

    實驗前,請將試劑盒、樣本取出;室溫放置半小時,恢復(fù)至室溫。

    第一步:ELISA緩沖液配制

    吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸餾水至1000毫升。

    第二步:標(biāo)準(zhǔn)品溶解和稀釋

    取出標(biāo)準(zhǔn)品,2000rpm 離心2分鐘,以便管壁上的粉末集中到管底,根據(jù)標(biāo)簽,加入一定的蒸餾水,蓋上蓋子,渦旋震蕩5秒,靜置10-30分鐘至粉末溶解,準(zhǔn)備8個1.5毫升的EP管,標(biāo)注S1至S7和空白,用于標(biāo)準(zhǔn)品對策梯度稀釋;

    加入150微升標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,吸取150微升重溶的標(biāo)準(zhǔn)品,至S1中進(jìn)行2倍稀釋,吹打10次混勻,渦旋震蕩5秒,從S1管中吸取150微升液體,至S2管中,吹打混勻,繼續(xù)以上步驟梯度稀釋至S2至S7;

    第三步:稀釋檢測抗體

    檢測抗體為100x濃縮液,所以吸取50微升檢測抗體,至5毫升1x Assay Buffer 震蕩混勻備用;

    第四步:加樣

    取出已恢復(fù)至室溫的酶標(biāo)板,加入300微升洗液,以洗去包被抗體保護(hù)劑,使包被抗體處于活性狀態(tài),靜置浸泡30秒。洗板結(jié)束后,立即使用酶標(biāo)板,不要讓酶標(biāo)板干燥。

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