国产综合精品日本亚洲777,国产av无码专区亚洲草草,色一情一乱一伦一区二区三区 ,国产第一色,国产精品视频久久久久,日韩大片高清播放器,国产亚洲精品久久yy50,亚洲精品久久久久久一区二区
您好,歡迎進入研域(上海)化學(xué)試劑有限公司網(wǎng)站!
一鍵分享網(wǎng)站到:
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 改良過碘酸鈉標(biāo)記法制備酶標(biāo)抗體

    改良過碘酸鈉標(biāo)記法制備酶標(biāo)抗體

    發(fā)布時間: 2011-10-24  點擊次數(shù): 3263次

    改良過碘酸鈉標(biāo)記法制備酶標(biāo)抗體

    HRP分子中與酶活性無關(guān)的糖基被過碘酸鈉氧化為醛基,再與抗體蛋白的氨基形成Schiff堿。為了防止酶蛋白的氨基與醛基發(fā)生自身偶聯(lián),在標(biāo)記前先用2,4-二硝基氟苯(DNFB)封閉酶蛋白中殘留的a-和e-氨基。酶與抗體的結(jié)合反應(yīng)后,再加入硼氫化鈉還原成穩(wěn)定的結(jié)合物。

    (1) 取HRP 5mg溶于0.2mol/L,pH5.6醋酸鹽緩沖液1ml中,加入1%DNFB無水乙醇溶液0.1ml,室溫下輕微攪拌1h;
    (2) 加入新鮮配置的0.1mol/L NaIO4 0.5ml,此時溶液由原棕色變?yōu)槟G色,置4℃放置30min,此時溶液由原棕色變?yōu)槟G色;
    (3) 加入2.5%乙二醇1ml, 室溫下輕微攪拌1h,終止反應(yīng);
    (4) 加入待標(biāo)記的抗體5-10mg, 用1.0mol/L, pH9.5 CBS,調(diào)節(jié)pH值至9.0;
    (5) 混勻,置4℃過夜改良過碘酸鈉標(biāo)記法制備酶標(biāo)抗體
    (6) 加入硼氫化鈉溶液0.1ml,混勻,4℃放置3h;
    (7) 對0.01mol/L,pH7.4 PBS,4℃透析過夜,換液3次;
    (8) 3000r/min離心30min,去除沉淀物;
    (9) 收集上清液即為酶標(biāo)記抗體。

    【注意事項】
    (1) 在氧化HRP時,以pH5.6醋酸鹽緩沖液溶解酶為宜。
    (2) 一般認(rèn)為氧化HRP 5mg, NaIO4量以0.06mol/L 0.5ml為宜,不能低于0.015mol/L 0.5ml。
    (3) 氧化HRP時間以15-30min為宜。
    (4) 加入DNFB的目的是為了封閉酶蛋白中殘留的a-和e-氨基。
    (5) 加入乙二醇的目的是終止反應(yīng);為便于在加入抗體后調(diào)pH值,故乙二醇要用0.05mol/L CBS配制。
    改良過碘酸鈉標(biāo)記法制備酶標(biāo)抗體
     

產(chǎn)品中心 Products
在線客服 聯(lián)系方式

服務(wù)熱線

021-54479081
021-54461587

亚洲欧美日韩在线不卡| 无码播放一区二区三区| 久久久久久亚洲AV无码专区高潮| 久久国产精品无码网站| 亚洲欧美精品aaaaaa片| 亚洲精品人成网线在线| 偷拍激情视频一区二区| 久久久国产精品人人片| 777精品久无码人妻蜜桃| 亚洲一区二区三区国产精华液| 色综合五月婷婷| 狂野欧美激情性xxxx| 成人国内精品久久久久一区| 国产精品宾馆精品酒店| 夜夜爽无码一区二区三区| 香蕉久人久人青草青草| 久久九九av免费精品| 亚洲精品久久久久久动漫器材一区| 男人j进女人p免费视频| 亚洲中文字幕播放视频| 亚洲精品国产熟女久久久| 蜜臀av在线播放一区二区三区| 国内精品人妻无码久久久影院导航 | gv天堂gv无码男同在线| 亚洲人妻中文字幕在线视频| 粉嫩国产白浆在线播放| 国产精品一国产精品| 精品国产第一福利网站| 国产久草视频| 精品视频无码一区二区三区| 亚洲熟妇av乱码在线观看| 无码人妻系列不卡免费视频| 在线毛片一区二区不卡视频| 亚洲an日韩专区在线| 日韩视频网址| 国产成人精品无码一区二| 久久人人做人人妻人人玩精| 精品久久国产综合婷婷五月 | 久久亚洲精品无码播放| 2021国产精品自产拍在线| 美女一区二区三区在线观看视频|