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    上海研域-ELISA試劑實驗細節盤點

    發布時間: 2023-08-15  點擊次數: 1285次

    ELISA細節盤點

    1. 樣本收集

    每個標本量收集體積=100ulx檢測指標,如要做復孔,標本量收集體積=10Oul×檢測指標×2。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20°℃或-70°℃條件下保存,避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20°℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。如需離心的樣本,離心轉速不宜過高(2000~3000)

    2. ELISA加樣

    加樣品時,單孔用量要求: ≥50ul/指標,如需要做2個復孔則血量≥100ul/指標。如果樣本量不充足,具體用量可咨詢您的專屬銷售。

    3. 樣品捕獲抗體孵育

    37C恒溫孵育,避免溫度變化過大

    4. 洗滌

    機洗: 將25x×洗滌緩沖液稀釋成1×,1×洗滌緩沖液洗三次,每次加300uL浸泡60s手洗:手洗次數應比機洗次數多,浸泡時間也應適當延長

    手洗容易導致吸附在酶標板底部的試劑脫落,從而導致結果偏小,手洗次數過多也會影響實驗結果,建議機洗

    5. 底物顯色(TMB顯色) 孵育

    TMB在使用前應放置室溫平衡30分鐘,加的量為A、B各50uL

    6. ELISA終止液終止反應

    加完TMB終止液應讓其混勻再在酶標儀上讀數

    7. 酶標儀讀數

    在450nm波長處測定O.D值

    8. 根據O.D值計算樣本濃度

    使用軟件擬合標準曲線,根據標準曲線的擬合度(r或R2)以及殘差平方和(s)選擇合適的曲線。

    上海研域生物有限公司,生命科學和生物醫學域十余年,是集研發、生產、銷售于一體的專業生物公司。公司目前可以提供多種生物學檢測試劑盒、進口常規生化ELISA試劑、抗體、標準品、血清等產品。如果您有實驗方面的需求和問題,都可以聯系我們,歡迎咨詢。

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