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    分光光度法測(cè)定葉綠素含量

    發(fā)布時(shí)間: 2010-04-08  點(diǎn)擊次數(shù): 7635次

    一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />  1.了解植物組織中葉綠素的分布及性質(zhì)。
      2.掌握測(cè)定葉綠素含量的原理和方法。

      二、實(shí)驗(yàn)原理
      葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中,并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后,葉綠素即游離出來(lái),游離葉綠素很不穩(wěn)定,對(duì)光、熱較敏感;在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素,在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種:葉綠素a 和b,兩者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

      葉綠素的含量測(cè)定方法有多種,其中主要有:
      1.原子吸收光譜法:通過(guò)測(cè)定鎂元素的含量,進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量。
      2.分光光度法:利用分光光度計(jì)測(cè)定葉綠素提取液在zui大吸收波長(zhǎng)下的吸光值,即可用朗伯—比爾定律計(jì)算出提取液中各色素的含量。

      葉綠素a 和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有zui大吸收,且兩吸收曲線相交于652nm 處。因此測(cè)定提取液在645nm、663nm、652nm 波長(zhǎng)下的吸光值,并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。

      三、儀器、原料和試劑

      儀器:分光光度計(jì)、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管。
      原料:新鮮(或烘干)的植物葉片
      試劑:1. 96%乙醇(或80%丙酮);2. 石英砂;3. 碳酸鈣粉

      四、操作步驟
      取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,去除中脈剪碎。稱(chēng)取剪碎的新鮮樣品2g,放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10mL,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。

      取濾紙1張置于漏斗中,用乙醇濕潤(rùn),沿玻棒把提取液倒入漏斗,濾液流至100mL 棕色容量瓶中;用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,zui后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?/p>

      用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。zui后用乙醇定容至100mL,搖勻。
    取葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)665nm、645nm 和652nm 下測(cè)定吸光度,以95%乙醇為空白對(duì)照。

      五、計(jì)算
      按照實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式,分別計(jì)算植物材料中葉綠素a、b 和總?cè)~綠素的含量。

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